Sebagai instrumen berketepatan tinggi, HPLC dengan mudah boleh membawa kepada beberapa masalah kecil yang menyusahkan jika ia tidak dikendalikan dengan cara yang betul semasa digunakan.Salah satu masalah yang paling biasa ialah masalah mampatan lajur.Cara cepat menyelesaikan masalah kromatografi yang rosak.Sistem HPLC terutamanya terdiri daripada botol takungan, pam, penyuntik, lajur, ruang suhu lajur, pengesan dan sistem pemprosesan data.Untuk keseluruhan sistem, tiang, pam dan pengesan adalah komponen utama dan lokasi utama yang terdedah kepada masalah.
Kunci kepada tekanan lajur ialah kawasan yang memerlukan perhatian rapi apabila menggunakan HPLC.Kestabilan tekanan lajur berkait rapat dengan bentuk puncak kromatografi, kecekapan lajur, kecekapan pemisahan dan masa pengekalan.Kestabilan tekanan lajur tidak bermakna nilai tekanan stabil pada nilai yang stabil, sebaliknya julat turun naik tekanan adalah antara 345kPa atau 50PSI (membolehkan penggunaan elusi kecerunan apabila tekanan lajur stabil dan perlahan-lahan berubah).Tekanan terlalu tinggi atau terlalu rendah ialah masalah tekanan lajur.
Yang paling terdedah kepada kegagalan dan penyelesaian HPLC
1, tekanan tinggi adalah masalah yang paling biasa dalam penggunaan HPLC.Ini bermakna peningkatan mendadak dalam tekanan.Secara umum, terdapat sebab-sebab berikut: (1) Secara amnya, ini disebabkan oleh penyumbatan saluran aliran.Pada ketika ini, kita harus menelitinya secara terperinci.a.Pertama, potong salur masuk pam vakum.Pada ketika ini, tiub PEEK telah diisi dengan cecair supaya tiub PEEK lebih kecil daripada botol pelarut untuk melihat sama ada cecair itu menitis sesuka hati.Jika cecair tidak menitis atau menitis perlahan, kepala penapis pelarut tersumbat.Rawatan: Rendam dalam 30% asid nitrik selama setengah jam dan bilas dengan air ultratulen.Jika cecair menitis secara rawak, kepala penapis pelarut adalah normal dan sedang diperiksa;b.Buka injap Purge supaya fasa mudah alih tidak melalui lajur, dan jika tekanan tidak berkurangan dengan ketara, kepala putih penapis disekat.Rawatan: Whitehead yang ditapis telah dikeluarkan dan disonikasi dengan 10% isopropanol selama setengah jam.Dengan mengandaikan bahawa tekanan menurun di bawah 100PSI, kepala putih yang ditapis adalah normal dan sedang diperiksa;c.Keluarkan hujung keluar lajur, jika tekanan tidak berkurangan, lajur disekat.Rawatan: Jika ia tersumbat garam penampan, bilas 95% sehingga tekanan normal.Jika halangan disebabkan oleh beberapa bahan yang lebih terpelihara, aliran yang lebih kuat daripada fasa mudah alih sekarang harus digunakan untuk bergegas ke arah tekanan normal.Jika tekanan pembersihan jangka panjang tidak berkurangan mengikut kaedah di atas, salur masuk dan keluar lajur boleh dianggap sebagai disambungkan ke instrumen sebaliknya, dan lajur boleh dibersihkan dengan fasa mudah alih.Pada masa ini, jika tekanan lajur masih tidak dikurangkan, plat ayak pintu masuk lajur hanya boleh diganti, tetapi apabila operasi tidak baik, mudah untuk membawa kepada pengurangan kesan lajur, jadi cuba gunakan kurang.Untuk masalah yang sukar, penggantian lajur boleh dipertimbangkan.
(2) Tetapan kadar aliran yang salah: Kadar aliran yang betul boleh ditetapkan semula.
(3) Nisbah aliran yang salah: indeks kelikatan perkadaran aliran yang berbeza adalah berbeza, dan tekanan sistem aliran yang sepadan dengan kelikatan yang lebih tinggi juga lebih besar.Jika boleh, pelarut dengan kelikatan yang lebih rendah boleh diganti atau ditetapkan semula dan disediakan.
(4) Tekanan sistem sifar hanyut: laraskan sifar penderia aras cecair.
2, tekanan terlalu rendah (1) biasanya disebabkan oleh kebocoran sistem.Perkara yang perlu dilakukan: Cari setiap sambungan, terutamanya antara muka pada kedua-dua hujung lajur dan ketatkan kawasan bocor.Tanggalkan tiang dan ketatkan atau lapik filem PTFE dengan daya yang sesuai.
(2) Gas memasuki pam, tetapi tekanan biasanya tidak stabil pada masa ini, tinggi dan rendah.Lebih serius, pam tidak akan dapat menyerap cecair.Kaedah rawatan: buka injap pembersihan dan bersihkan pada kadar aliran 3~5ml/min.Jika tidak, gelembung udara disedut pada injap ekzos menggunakan tiub jarum khusus.
(3) Tiada aliran keluar fasa mudah alih: semak sama ada terdapat fasa mudah alih dalam botol takungan, sama ada sinki direndam dalam fasa mudah alih, dan sama ada pam sedang berjalan.
(4) Injap rujukan tidak ditutup: injap rujukan ditutup selepas nyahpecutan.Ia biasanya turun kepada 0.1.~ 0.2mL/ min selepas menutup injap rujukan.
Ringkasan:
Dalam kertas ini, hanya masalah biasa dalam kromatografi cecair dianalisis.Sudah tentu, dalam aplikasi praktikal kita, kita akan menghadapi lebih banyak masalah lain.Dalam pengendalian kesalahan, kita harus mengikut prinsip berikut: hanya menukar satu faktor pada satu masa untuk menentukan hubungan antara faktor hipotesis dan masalah;Secara amnya, apabila menggantikan bahagian untuk penyelesaian masalah, kita harus memberi perhatian untuk meletakkan semula bahagian utuh yang telah dibongkar untuk mengelakkan pembaziran;Membentuk tabiat rekod yang baik adalah kunci kepada kejayaan pengendalian kesalahan.Kesimpulannya, apabila menggunakan HPLC, adalah penting untuk memberi perhatian kepada prarawatan sampel dan operasi dan penyelenggaraan peralatan yang betul.
Masa siaran: Sep-18-2023