Pemindahan tenaga resonans pendarfluor (FRET)
Pemindahan tenaga resonans pendarfluor (FRET) ialah proses pemindahan tenaga bukan sinaran di mana tenaga keadaan teruja penderma dipindahkan ke keadaan teruja penerima melalui interaksi pasangan elektrik antara molekul.Proses ini tidak melibatkan foton dan oleh itu bukan sinaran.Ujian ini mempunyai kelebihan iaitu pantas, sensitif dan mudah.
Pewarna yang digunakan dalam ujian FRET boleh sama.Tetapi dalam kebanyakan aplikasi, pewarna yang berbeza sebenarnya digunakan.Secara ringkasnya, pemindahan tenaga resonans bercahaya ialah pemindahan sepasang dipol daripada penderma (pewarna 1) kepada penerima (pewarna 2) apabila kumpulan penderma teruja.Secara umum, spektrum pelepasan kumpulan fluorophore Donor bertindih dengan spektrum penyerapan kumpulan Penerima.“Apabila jarak antara dua fluorofor adalah sesuai (10 — 100 A), pemindahan tenaga fluorofor daripada penderma kepada penerima boleh diperhatikan.”Kaedah pemindahan tenaga bergantung kepada struktur kimia reseptor:
1. Ditukarkan kepada getaran molekul, iaitu, cahaya bercahaya pemindahan tenaga hilang.(Reseptor adalah pemadam cahaya)
2. Pelepasan lebih sengit daripada reseptor itu sendiri, mengakibatkan anjakan merah dalam spektrum pendarfluor sekunder.”(Reseptor adalah pemancar bercahaya).
Kumpulan penderma (EDANS) dan gen penerima (DABCYL) dikaitkan secara seragam kepada substrat semula jadi protease HIV, dan apabila substrat tidak diputuskan, DABCYL boleh memadamkan EDANS dan kemudian menjadi tidak dapat dikesan kepada fluorin.Selepas pemutusan sambungan protease HIV-1, EDANS tidak lagi dipadamkan oleh DABCYL, dan EDANS luciferases kemudiannya boleh dikesan.Ketersediaan perencat protease boleh dipantau oleh perubahan dalam intensiti pendarfluor EDANS.
Peptida FRET ialah alat yang mudah untuk mengkaji ketakspesifikan peptidase.Memandangkan proses tindak balasnya boleh dipantau secara berterusan, ia menyediakan kaedah yang mudah untuk mengesan aktiviti enzim.Kilauan yang dihasilkan selepas hidrolisis ikatan peptida oleh penderma/penerima memberikan ukuran aktiviti enzim pada kepekatan nanomolar.Apabila peptida FRET utuh, ia menunjukkan denyar dalaman yang hilang secara tiba-tiba, tetapi apabila sebarang ikatan peptida yang bertentangan dengan penderma/penerima putus, ia mengeluarkan denyar, yang boleh dikesan secara berterusan dan aktiviti enzim kemudiannya boleh dikira.
Masa siaran: 14 Ogos 2023